灯笼草因其果实像灯笼，故以灯笼为名，又名酸浆、锦灯笼、苦灯笼、黄菇娘等，为直立多年生草本植物，在我国各地均有分布，是我国传统中药中的一种。根据《南宁市药物志》记载，灯笼草味苦微甘，有清热杀虫、止痛消肿之效，在毒疮、疱疹、疖疮、疝气以及伤寒等的治疗上都有奇效。研究表明，灯笼草中含有酸浆苦素类物质，具有体外抗肿瘤的作用，能有效抑制癌细胞的生长繁殖。本研究探讨灯笼草提取物对体外肝癌细胞活性的影响。

制备灯笼草提取物。取200g灯笼草，分批加入到500mL液氮中速冻并捣碎至粉末状，取100g粉末，加入200mL去离子水浸泡24h，蒸煮，冷却，离心，过滤除菌，制备无菌溶液备用。

取出冻存的人H22肝癌细胞，在37℃水浴锅中快速融化后，1000rpm离心5min。弃除冻存液，用新鲜配制的细胞培养基（RPMI-1640内含10%小牛血清）重悬细胞沉淀，重悬液转移至T25细胞培养瓶，在37℃ 5% CO2培养箱中培养。

检测不同药物浓度对细胞生长的抑制率。收集处于对数生长期的H22细胞，计数后，用RPMI-1640培养基稀释至5000个每毫升，按0.1mL每孔接种于96孔细胞培养板，于5% CO2细胞培养箱中过夜培养。次日，每孔加入10μL不同浓度的灯笼草提取物，继续培养。实验设置空白对照组、正常对照组、实验组，空白对照孔中只有细胞培养基，正常对照组为正常培养的H22细胞，实验组中加入的药物的终浓度（μg/mL）分别为260、52、10.4、2.08、0.42，每组各设5个复孔。药物48h后，从细胞培养箱中取出培养板，在超净工作台下向每孔加入10μL CCK-8试剂，于细胞培养箱中继续孵育4h。孵育结束后，用酶标仪测定各组的吸光度值，按照试剂盒说明书方法计算不同浓度药物对细胞生长的抑制率，绘制药物浓度-抑制率关联曲线，计算半数抑制浓度IC50。

检测不同的药物作用时间对细胞生长抑制率。对数生长期的H22细胞，按5000个每孔接种于96孔细胞培养板中，培养过夜，然后每孔加入10μL灯笼草提取物（药物作用浓度为14.2μg/ml）。实验设置空白对照组、正常对照组、实验组，实验组设置3个药物作用时间（24h、48h、72h、96h）。药物作用结束后，每孔加入10μL CCK-8试剂，于细胞培养箱中继续孵育4h。孵育结束后，测定各组的吸光度值，计算各组的抑制率。

结果发现，灯笼草提取物对肝癌细胞H22的初始作用浓度为260μg/mL。药物作用细胞48h后，高浓度的灯笼草提取物能显著抑制肝癌细胞生长（260μg/mL抑制率为95.13%、52μg/mL抑制率为76.65%），而且提取物对细胞的生长抑制呈现显著的浓度依赖性（图1）。根据线性拟合公式，计算得出灯笼草提取物对H22生长的半数抑制浓度IC50为14.2μg/ml，以此浓度作为后续细胞实验研究的药物作用浓度。

图1 不同浓度药物对H22生长的抑制作用

灯笼草提取物可以剂量依赖性抑制肝癌细胞H22的生长，其半数抑制浓度为14.2μg/ml。采用CCK-8法考察灯笼草提取物作用24h、48h、72h、96h后，药物对H22细胞的抑制率（表1）。

表1 药物作用时间与细胞抑制率的关系

注：*： p＜0.05；**： p＜0.01

药物作用48h、72h的抑制率明显高于24h组（52.81% vs 23.25%，p＜0.01；63.03% vs 23.25%，p＜0.01），差异有统计学意义；药物作用96h时，细胞生长抑制率有所降低（39.41% vs 23.25%，p＜0.05）（图2）。

图2 灯笼草对H22生长抑制作用与时间的关系

灯笼草根茎含有丰富的有机酸、氨基酸、黄酮甙、酚类及糖类等有机物质，果壳含柠檬酸、植物甾醇、无定形甙、鞣质、还原糖等物质。在上世纪90年代农村，灯笼草主要用于治疗感冒、咽喉肿痛、腮腺炎等病症。现代研究表明灯笼草具有多种药理作用，灯笼草提取物可使肠道的通透性增加且具有抗原性，对食物过敏具有明显地调节和缓解作用，对免疫性肝损伤具有较强的治疗效果，可有效抑制c–fos、c-jun、HMGB1的表达。

Yen CY等研究表明，在灯笼草内有一种叫做4β羟基睡茄内酯E的内酯成分对多种肿瘤细胞有抑制作用，并且这种内酯成分对人肺腺癌细胞拥有非常强大的抑制作用，、You BJ、Wu SJ、Quispe-Mauricio A等团队分别发现灯笼草对多种癌症细胞有抑制作用，因此我们选用肝癌细胞作为研究对象，研究灯笼草对癌细胞活性的影响。实验结果显示，高浓度的灯笼草提取物能显著抑制肝癌细胞生长，而且提取物对细胞的生长抑制呈现显著的浓度依赖性，随着对灯笼草提取液的稀释，对肿瘤细胞的抑制作用减小。同时，灯笼草提取液对细胞生长的抑制作用呈时间依赖性增长，但是在药物作用96h后，抑制率没有升高，反而抑制率变小，可能原因是药物在37℃时间过长导致其有效成分降解，而且部分对药物作用不明显的细胞扩增导致活细胞增多。

综上所述，灯笼草提取物能够有效抑制肝癌细胞H22的生长增殖，为灯笼草作为临床癌症辅助治疗药物提供科学依据。

 （第一作者系医学系学生，指导教师：杨晓晖）